Uzlabots gēnu elektroporators

GP-3000 – gēnu elektroporators

GP-3000 gēnu elektroporators sastāv no galvenās ierīces, gēnu elektroporācijas kivetes un specializētiem savienojuma kabeļiem. Tā izmanto elektroporāciju, lai ievadītu DNS kompetentajās šūnās, augu un dzīvnieku šūnās, kā arī rauga šūnās. Salīdzinājumā ar citam transformācijas metodēm tā nodrošina augstu atkārtojamību, augstu efektivitāti, vienkāršu lietošanu un precīzu vadību, un tā kā elektroporācija ir fizikāls, nevis ķīmisks vai vīrusu process, tā rada niecīgu genotoksicitāti. Salīdzinājumā ar SCIENTZ-2CS, GP-3000 papildus eksponenciālajai samazināšanai piedāvā arī taisnstūra impulsa režīmu, precīzāku zemsprieguma un augstsprieguma kapacitātes regulēšanu, kā arī konfigurējamu daudzimpulsu izlādi prasīgākiem protokoliem.

Darbības princips

Elektroporācija (šūnu elektroporācija) ievada ekzogēnās makromolekulas – DNS, RNS, siRNS un olbaltumvielas, kā arī nelielas molekulas – šūnās. Spēcīga, īslaicīga elektriskā lauka ietekmē šūnas membrāna kļūst caurlaidīga, ļaujot lādētām ekzogēnām vielām to šķērsot līdzīgi elektroforézei. Tā kā fosfolipīdu dubultslānim ir augsta pretestība, lielāko daļu pielītota sprieguma uzņem membrāna, kamēr citoplazmā nokļūst tikai neliela strāva, un spriegums pie kāola membrānas ir ļoti zems, kas notur citotoksicitāti un genotoksicitāti niecīgā līmenī. Kā fizikāla metode elektroporācija lielā mērā nav atkarīga no šūnas virsmas molekulārajām īpašībām, tāpēc to var izmantot gandrīz jebkuram šūnu tipam, un rezultātus var viegli kvantitatīvi novērtēt.

Priekšrocības

• Augsta efektivitāte – īss transformācijas laiks, augsts konversījas rādītājs, izcila atkārtojamība
• Inteliģenta atmiņa – eksperimentālos parametrus var saglabāt un viegli izgūt
• Precīza vadība – mikroprocesora vadīta impulsa izlāde
• Estētisks, integrēts dizains – intuitīvs skārienekrāns, vienkārša lietošana

Tehniskie parametri

• Impulsa veids: eksponenciāla samazināšanās un taisnstūra impulss
• Augstsprieguma izeja: 401–3000 V
• Zemsprieguma izeja: 50–400 V
• Barošana: 100–240 VAC, 50/60 Hz, 100 W
• Secīgo izlāžu skaits: 1–9
• Zemsprieguma kapacitāte: 25–1575 µF, ar 1 µF soli (ieteicams solis 25 µF)
• Augstsprieguma kapacitāte: 10–60 µF, ar 1 µF soli (ieteicami 10/25/35/50/60 µF)
• Paralēlā pretestība: 50–1650 Ω, ar 50 Ω soli
• Izlādes un intervāla laiks: 0,1–999 ms, ar 0,1 ms soli
• Vadības sistēma: mikrodatora vadība, regulējama RC laika konstante
• Galvenās ierīces izmēri: 30 × 20 × 20 cm; neto svars 4,5 kg

Standarta sistēmas konfigurācija

Galvenā ierīce, gēnu elektroporācijas kivete, specializēti savienojuma kabeļi.

Orientējoši elektroporācijas parametri pēc organisma

Piezīme: parametri dažādās laboratorijās atšķiras un ir sniegti tikai orientējošos nolūkos.

GP-3000 gēnu elektroporatora lietojumi

• Baktēriju, rauga un citu mikroorganismu elektroporācija
• Zīdītāju šūnu, augu audu un protoplastu transfekcija
• Šūnu hibridizācija un gēnu saplūšana
• Marķiera gēnu ievadīšana marķēšanas un indikācijas nolūkos
• Zāļu, olbaltumvielu, antivielu un citu molekulu ievadīšana šūnas struktūras un funkcijas pētīšanai

Tipiskas lietojuma jomās iekļauj pārtikas rūpniecību, lauksaimniecības zinātnes, veterināro pētniecību un bioinženieriju.